loader

Основен

Лечение

Технология на производството на инсулин

Инсулинът е един от хормоните, произвеждани от човешкото тяло, по-специално панкреаса. Нарушаването на секрецията на това вещество води до появата на такова сериозно заболяване като диабет. За неговото лечение използвайте синтетичен хормон, който отдавна е изолиран от панкреаса на добитъка. Alnako отдавна използва технологията за производство на инсулин с помощта на много разпространена бактерия - Е. coli (Escherichia coli) или гъбички от дрожди. Използването на този метод избягва алергичните реакции, причинени от чужд протеин, имащ малка разлика от човека.

Технологична схема

Технологията на производството на инсулин включва всички основни етапи от производството на биотехнологични продукти. Резултатът е последната кристален продукт, който след това се използва за получаване на инжекционни разтвори, използвани при лечението на тежки форми на захарен диабет тип I и II. Основният ефект на този хормон в организма се проявява в намаляването на съдържанието на глюкоза в кръвта.

Етапите на производство на инсулин ще бъдат както следва:

  • Предварителен. Извършва такива операции като подготовка и пречистване на вода и въздух, почистване на производствени съоръжения и стерилизация на оборудване, извършване на проверки на персонала, обработка на ръцете и доставка на стерилни обувки и дрехи. Също така в предварителния етап е направен първичният химичен синтез на вериги от молекули, от които ще бъде сглобен инсулиновият протеин. Във веригата А има 21 аминокиселинни остатъка и във веригата B - 30.
  • Приготвяне на хранителни разтвори и клетъчни култури. За да принуди живата клетка да произведе необходимото съединение, тя въвежда съответния ген. За това плазмидните клетки се отрязват със специални ензими - рестриктази и се зашиват в гени, които кодират синтеза на необходимите съединения. След това, чрез микроинжекционен метод, модифицираният плазмид се връща в клетката.
  • Култивиране на клетъчната суспензия. Генетично модифицираните клетки се поставят в хранителен разтвор, който съдържа всички съставки, необходими за растежа и репродукцията и се стерилизира. Култивирането на културата се извършва в специални биореактори, където се доставя предварително пречистен въздух. Периодично към реактора се добавя определено количество хранителен разтвор и същевременно се изтегля същия обем от клетъчната суспензия.
  • Разпределение на културата. Отделянето на флуидната и клетъчната култура се извършва чрез утаяване (утаяване) в специални утаители и след това чрез филтриране, което позволява да се запази колкото е възможно по-голяма целостта на клетките.
  • Хроматографско пречистване на веществото. Извършва се на подходящо оборудване, като се използват различни методи, по-специално фронтална, анионообменна и гел-пропусклива хроматография.
  • Получаване на протеинова молекула. На биотехнологичния стадий се случва синтеза на неприготвена молекула инсулин. И двата компонента на веригите му. Тяхното омрежване се извършва след окисляване и сгъване на получените вериги, което води до образуване на дисулфидни мостове.
  • Сублимационно сушене в специална пещ, след което полученият кристален препарат се проверява за съответствие със стандарта, опакован, етикетиран и доставен на потребителя.

Нашата компания предлага благоприятни условия за готови производствени линии, където се наблюдава пълна технология на производството на инсулин. Благодарение на точните изчисления, техническата и информационна поддръжка и обучението на персонала в рамките на всеобхватна програма, предприятието ще бъде рентабилно и неговите продукти ще бъдат търсени.

От това, което произвежда инсулин

Инсулинът е основното лекарство за лечение на диабет тип 1. Понякога се използва и за стабилизиране на състоянието на пациента и подобряване на здравословното му състояние при втория вид заболяване. Това вещество по своята същност е хормон, който в малки дози може да повлияе на метаболизма на въглехидратите. Обикновено панкреасът произвежда достатъчно инсулин, който спомага за запазването на физиологичното ниво на захарта в кръвта. Но при сериозни нарушения на ендокринната система инсулиновите инжекции често са единствената възможност да помогнат на пациента. За да се приеме перорално (под формата на таблетки), за съжаление е невъзможно, тъй като напълно се срива в храносмилателния тракт и губи своята биологична стойност.

Варианти за получаване на инсулин за използване в медицинската практика

Много диабетици за някои поведнъж зададоха въпрос, от какво се използва инсулинът за медицинските цели? Понастоящем най-често това лекарство се получава с помощта на методи на генното инженерство и биотехнологиите, но понякога се извлича от суровини от животински произход.

Препарати, получени от суровини от животински произход

Получаването на този хормон от панкреаса на свине и едър рогат добитък е стара технология, която се използва днес доста рядко. Това се дължи на ниското качество на лекарството, неговата тенденция да предизвика алергични реакции и недостатъчна степен на пречистване. Факт е, че тъй като хормонът е протеиново вещество, то се състои от специфичен набор от аминокиселини.

В началото и средата на 20-ти век, когато няма подобни лекарства, дори такъв инсулин беше пробив в медицината и позволи лечението на диабетици да бъде доведено до ново ниво. Хормоните, получени по този метод, намаляват кръвната захар, но често причиняват странични ефекти и алергии. Разликите в състава на аминокиселините и примесите в лекарството оказват влияние върху състоянието на пациентите, особено при по-уязвимите категории пациенти (деца и възрастни). Друга причина за лошата толерантност на такъв инсулин е наличието на неговия неактивен прекурсор в лекарството (проинсулин), което е невъзможно да се отърве от тази вариация на лекарството.

В наше време има подобрени свински инсулини, които нямат тези недостатъци. Те се получават от панкреаса на свинята, но след това им се дава допълнително лечение и пречистване. Те са многокомпонентни и съдържат помощни вещества.

Такива лекарства се толерират от пациентите много по-добре и не предизвикват нежелани реакции, те не потискат имунитета и ефективно намаляват кръвната захар. Говеждият инсулин днес не се използва в медицината, защото поради външната си структура той оказва негативно влияние върху имунната и други системи на човешкото тяло.

Генетично конструиран инсулин

Човешкият инсулин, който се използва за диабетици в промишлен мащаб, се получава по два начина:

  • чрез ензимно лечение на свински инсулин;
  • използвайки генетично модифицирани щамове на Escherichia coli или дрожди.

Когато физикохимичните промени в молекулата на свински инсулин под действието на специални ензими стават идентични с човешкия инсулин. Аминокиселинният състав на получения препарат не се различава от състава на естествения хормон, който се получава при хора. В производствения процес лекарството е високо пречистено, така че не предизвиква алергични реакции и други нежелани прояви.

Но най-често инсулин се получава с помощта на модифицирани (генетично модифицирани) микроорганизми. Бактериите или дрождите чрез биотехнологични методи се променят по такъв начин, че да могат сами да произвеждат инсулин.

Има 2 начина за получаване на инсулин като този. Първата от тях се основава на използването на два различни щама (видове) на един микроорганизъм. Всеки от тях синтезира само една верига от ДНК молекулата на хормона (има само два от тях и те са усукани в спирали). Тогава тези вериги са свързани и в получения разтвор вече е възможно да се отделят активните форми на инсулин от тези, които не носят никаква биологична значимост.

Вторият начин за получаване на лекарството с Е. coli или дрожди се основава на факта, че микробът първо произвежда неактивен инсулин (т.е. негов прекурсор, проинсулин). След това, с помощта на ензимна обработка, тази форма се активира и се използва в медицината.

Всички тези процеси обикновено са автоматизирани, въздухът и всички контактни повърхности с ампули и флакони са стерилни, а линиите с оборудване са херметически затворени.

Методите на биотехнологиите дават възможност на учените да мислят за алтернативни решения на проблема със захарния диабет. Например досега са проведени предклинични изследвания на производството на изкуствени бета-клетки на панкреаса, които могат да бъдат получени чрез използване на техники за генно инженерство. Може би в бъдеще те ще бъдат използвани за подобряване на функционирането на това тяло в болен човек.

Допълнителни компоненти

Производството на инсулин без спомагателни вещества в съвременния свят е почти невъзможно да си представим, защото позволява да се подобрят неговите химични свойства, да се удължи времето за действие и да се постигне висока степен на чистота.

Поради свойствата си, всички допълнителни съставки могат да бъдат разделени на следните класове:

  • Продължители (вещества, които се използват за осигуряване на по-продължителна продължителност на лекарството);
  • дезинфекциращи компоненти;
  • стабилизатори, поради които се поддържа оптимална киселинност в лекарствения разтвор.

Удължаване на добавките

Има дългодействащ инсулин, чиято биологична активност продължава от 8 до 42 часа (в зависимост от групата на лекарството). Този ефект се постига чрез добавяне към инжекционния разтвор на специални вещества - удължители. Най-често едно от тези съединения се използва за тази цел:

Протеините, които удължават действието на лекарството, се подлагат на подробно пречистване и са ниско алергични (например протамин). Цинкови соли също нямат отрицателен ефект нито върху инсулиновата активност, нито върху благополучието на човека.

Антимикробни съставки

Дезинфектанти в състава на инсулина са необходими, за да не се умножава микробната флора по време на съхранение и употреба. Тези вещества са консерванти и гарантират безопасността на биологичната активност на лекарството. Освен това, ако един пациент влезе в хормон от един флакон само за себе си, тогава лекарството може да бъде достатъчно за него за няколко дни. Поради качествените антибактериални компоненти той няма да изхвърля неизползвания продукт поради теоретичната възможност за възпроизвеждане в разтвор на микроби.

Като дезинфектант в производството на инсулин тези вещества могат да се използват:

За производството на всеки тип инсулин са подходящи дезинфектанти. Тяхното взаимодействие с хормона се изследва задължително на етапа на предклиничните проучвания, тъй като консервантът не трябва да нарушава биологичната активност на инсулина или по някакъв начин да окаже негативно влияние върху неговите свойства.

Използването на консерванти в повечето случаи ви позволява да инжектирате хормона под кожата без предварителното му третиране с алкохол или други антисептици (производителят обикновено споменава това в ръководството). Това опростява приложението на лекарството и намалява броя на подготвителните манипулации преди самата инжекция. Но тази препоръка работи само ако разтворът се инжектира с отделна инсулинова спринцовка с тънка игла.

стабилизатори

Стабилизаторите са необходими, за да се гарантира, че рН на разтвора се поддържа на предварително определено ниво. Нивото на киселинност зависи от безопасността на лекарството, неговата активност и стабилността на неговите химични свойства. За производството на инжектируем хормон за диабетици обикновено се използват фосфати за тази цел.

За инсулини с цинк не винаги са необходими стабилизатори на разтвора, тъй като металните йони спомагат за поддържането на необходимия баланс. Ако все още се прилагат, вместо фосфати се използват други химични съединения, тъй като комбинация от тези вещества води до утаяване и неспособност на лекарството. Важно свойство за всички стабилизатори е безопасността и невъзможността да навлизат в реакциите с инсулин.

Изборът на инжектиране на лекарства за диабет за всеки отделен пациент трябва да се извършва от компетентен ендокринолог. Задачата на инсулина е не само да поддържа нормалното ниво на кръвната захар, но и да не уврежда други органи и системи. Лекарството трябва да бъде химически неутрално, ниско алергично и за предпочитане достъпно. Също така е доста удобно, ако избраният инсулин може да бъде смесен с другите му варианти по времетраенето на действието.

Какво прави инсулин за диабетици: модерно производство и методи за получаване

Инсулинът е хормон, който играе решаваща роля за нормалното функциониране на човешкото тяло. Той се произвежда от клетките на панкреаса и помага за усвояването на глюкозата, която е основният източник на енергия и основната храна за мозъка.

Но понякога, по някаква причина или друга причина, отделянето на инсулин в организма е значително намалено или преустановено изцяло, както трябва да бъде и как да помогнем. Това води до сериозно нарушаване на метаболизма на въглехидратите и до появата на такова опасно заболяване като диабет.

Без своевременно и адекватно лечение това заболяване може да доведе до сериозни последици до загуба на зрение и крайници. Единственият начин да се предотврати развитието на усложнения са редовните инжекции на изкуствено получен инсулин.

Но какво прави инсулинът за диабетици и как влияе върху тялото на пациента? Тези въпроси са от интерес за много хора, диагностицирани със захарен диабет. За да се разбере това, е необходимо да се обмислят всички методи за получаване на инсулин.

вид

Съвременните инсулинови препарати се различават по следните признаци:

  • Източник на произход;
  • Продължителност на действието;
  • рН на разтвора (кисела или неутрална);
  • Наличие на консерванти (фенол, крезол, фенол-крезол, метилпарабен);
  • Концентрацията на инсулин е 40, 80, 100, 200, 500 U / ml.

Тези признаци оказват влияние върху качеството на лекарството, неговата цена и степента на излагане на тялото.

Източници на информация

В зависимост от източника на препарата инсулиновите препарати се разделят на две основни групи:

Животни. Те се получават от панкреаса на говеда и свине. Те могат да бъдат опасни, тъй като често причиняват сериозни алергични реакции. Това важи особено за говеждият инсулин, който съдържа три аминокиселини, които не са характерни за човека. Свинския инсулин е по-безопасен, защото се различава само с една аминокиселина. Следователно, той се използва по-често при лечението на захарен диабет.

Human. Те са два вида: подобен полусинтетичен човешки или получени от свински инсулин чрез ензимно превръщане и човешки или рекомбинантна ДНК, които произвеждат колиформени бактерии чрез генно инженерство. Тези инсулинови препарати са напълно идентични с хормона, произвеждан от човешкия панкреас.

Днес в лечението на диабета се използва широко инсулин, както от човешки, така и от животински произход. Съвременното производство на инсулинови животни предполага най-висока степен на пречистване на лекарството.

Това помага да се отстрани от такива нежелани примеси като проинсулин, глюкагон, соматостатин, протеини, полипептиди, които могат да причинят сериозни странични ефекти.

Най-добрият препарат от животински произход е съвременният монопичен инсулин, т.е. произведен с изолирането на "върха" на инсулина.

Продължителност на действието

Производството на инсулин се извършва в съответствие с различни технологии, което позволява получаване на препарати с различна продължителност на действие, а именно:

  • свръхскоростно действие;
  • кратко действие;
  • продължително действие;
  • средна продължителност на действие;
  • продължително действие;
  • комбинирано действие.

Инсулини с ултра-бързо действие. Тези инсулинови препарати се различават по това, че започват да действат непосредствено след инжектирането и достигат своя връх след 60-90 минути. Общото им време за действие е не повече от 3-4 часа.

Съществуват два основни типа инсулин с изключително кратко действие - това са Lizpro и Aspart. Приготвянето на инсулин Lizpro се извършва чрез пренареждане на два аминокиселинни остатъка в хормоналната молекула, а именно лизин и пролин.

Благодарение на такава модификация на молекулата е възможно да се избегне образуването на хексамери и да се ускори разграждането му в мономери, което означава подобряване на асимилацията на инсулин. Това ви позволява да получите инсулинов продукт, който влиза в кръвта на пациента три пъти по-бързо от естествения човешки инсулин.

Друг инсулин с ултрасвързано действие е Aspart. Методите за получаване на Asparta инсулин са в много отношения подобни на производството на Lyspro, само в този случай пролинът е заменен с отрицателно заредена аспарагинова киселина.

Също така, подобно на Lizpro, Aspart бързо се разпада на мономери и следователно почти мигновено се абсорбира в кръвта. Всички препарати на инсулин с ултра-бързо действие могат да се прилагат точно преди хранене или непосредствено след приемането му.

Кратко действащи инсулини. Тези инсулини са буферни разтвори с неутрално рН (от 6.6 до 8.0). Препоръчва се да се прилагат подкожно под формата на инсулин, но при необходимост се допуска интрамускулно инжектиране или капкомер.

Тези инсулинови препарати започват да действат още 20 минути след поглъщането. Тяхното действие продължава сравнително кратко - не повече от 6 часа и достига своя максимум след 2 часа.

Кратко действащият инсулин се произвежда главно за лечение на пациенти с диабет в болнична обстановка. Те ефективно помагат на пациентите с диабетна кома и прикома. Освен това те позволяват най-точното определяне на необходимата доза инсулин за пациента.

Инсулин със средна продължителност на действие. Тези лекарства се разтварят далеч по-зле от инсулините с кратко действие. Поради това, те идват по-бавно в кръвта, което значително увеличава техния хипогликемичен ефект.

Приготвянето на инсулин със средна продължителност на действие се постига чрез въвеждане в неговия състав на специално удължаващо средство - цинк или протамин (изофан, протафан, базал).

Такива инсулинови препарати се предлагат под формата на суспензии с определено количество кристали от цинк или протамин (най-често протамин Hagedorn и изофан). Удължителите значително увеличават времето за абсорбция на лекарството от подкожната тъкан, което значително увеличава времето, през което инсулинът влиза в кръвта.

Инсулини с продължително действие. Това е най-модерният инсулин, което стана възможно благодарение на развитието на ДНК-рекомбинантната технология. Първият инсулинов препарат за дълго време е Glargin, който е точен аналог на хормона, произведен от човешкия панкреас.

За да се получи това, се извършва сложна модификация на молекулата на инсулина, включваща заместването на аспарагина с глицин и последващото добавяне на два остатъка от аргинин.

Гларжин се произвежда под формата на бистър разтвор с рН характеристика 4. Това кисело рН води до по-стабилни хексамери на инсулин, и по този начин да се осигури продължително и предвидим абсорбция на лекарството в кръвта на пациента. Въпреки това, поради киселинното рН, Glargin не се препоръчва да се комбинира с краткодействащ инсулин, който обикновено има неутрално рН.

Повечето инсулинови препарати имат т.нар. "Пик на действие", когато достигне най-високата концентрация на инсулин в кръвта на пациента. Основната характеристика на Glargin обаче е, че той няма изричен връх на действие.

Само една инжекция на ден е достатъчна, за да осигури на пациента надежден, не-пиков гликемичен контрол за следващите 24 часа. Това се постига благодарение на факта, че Glargine се абсорбира от подкожната тъкан със същата скорост през целия период на действие.

Дългодействащите инсулинови препарати се произвеждат в различни форми и могат да осигурят на пациента хипогликемичен ефект до 36 часа подред. Това помага значително да намали броя на инжекциите инсулин на ден и по този начин значително да облекчи живота на пациентите с диабет.

Важно е да се отбележи, че Glargin се препоръчва само за подкожни и мускулни инжекции. Това лекарство не е подходящо за лечение на коматоза или прекоматит при пациенти със захарен диабет.

Комбинирани препарати. Тези лекарства се предлагат под формата на суспензия, която включва неутрален разтвор на инсулин с кратко действие и инсулин със средно действие с изофан.

Такива медикаменти позволяват на пациента да прилага инсулин с различна продължителност на действие в тялото си само с една инжекция, което означава избягване на допълнителни инжекции.

Дезинфекциращи компоненти

Дезинфекциране препарати на инсулин е от решаващо значение за безопасността на пациента, като те се въвеждат в тялото чрез инжектиране чрез кръвния поток и се разпространява през всички вътрешни органи и тъкани.

Определено бактерицидно действие има някои вещества, които се добавят към инсулиновия състав не само като дезинфектант, но и като консерванти. Те включват крезол, фенол и метилпарабензоат. В допълнение, изразен антимикробен ефект също е характерен за цинкови йони, които са част от някои инсулинови разтвори.

Многостепенната защита срещу бактериална инфекция, която се постига чрез добавянето на консерванти и други антисептични средства, помага да се предотврати развитието на много сериозни усложнения. След многократно инжектиране на иглата на спринцовката във флакон с инсулин може да причини замърсяване на препарата с патогенни бактерии.

Бактерицидните свойства на разтвора обаче помагат да се унищожат вредните микроорганизми и да се запази тяхната безопасност за пациента. Поради тази причина пациентите със захарен диабет могат да използват същата спринцовка, за да извършват хиподермични инжекции инсулин до 7 пъти подред.

Друго предимство на консервантите в състава на инсулина е липсата на необходимост от дезинфекция на кожата преди инжектиране. Но това е възможно само при използване на специални инсулинови спринцовки, снабдени с много тънка игла.

Трябва да се подчертае, че наличието на консерванти в инсулина не влияе неблагоприятно върху свойствата на лекарството и е напълно безопасно за пациента.

заключение

Досега инсулинът, получен както с употребата на панкреаса на животните, така и с модерните методи на генното инженерство, се използва широко за създаване на голям брой лекарства.

Най-предпочитаните за дневна инсулинова терапия са високо пречистените ДНК-рекомбинантни човешки инсулини, които имат най-ниска антигенност и следователно не предизвикват алергични реакции. Освен това високото качество и безопасността се осигуряват от лекарства, базирани на аналози на човешкия инсулин.

Инсулиновите препарати се продават в стъклени бутилки с различен капацитет, херметично затворени с гумени запушалки и покрити с алуминий. Освен това те могат да бъдат закупени със специални спринцовки за инсулин, както и със спринцовки, които са особено удобни за деца.

Понастоящем се разработват нови форми на инсулинови препарати, които се инжектират в тялото интраназално, т.е. през носната лигавица.

Установено е, че комбинирането на инсулин с детергент, е възможно да се създаде аерозолно лекарство, което да достигне необходимата концентрация в кръвта на пациента толкова бързо, колкото и при интравенозно инжектиране. Освен това се създават най-новите перорални инсулинови препарати, които могат да се приемат през устата.

Досега тези видове инсулин са все още в етап на разработка или са подложени на необходимите клинични тестове. Очевидно е обаче, че в близко бъдеще ще се появят инсулинови препарати, за които няма нужда да се инжектират спринцовки.

Най-новите инсулинови продукти ще бъдат произведени под формата на спрейове, които просто ще трябва да се пръскат на лигавицата на носа или устата, за да задоволят напълно нуждите на организма от инсулин.

От какво се състои инсулинът (производство, производство, производство, синтез)

Инсулинът е жизненоважен лекарствен продукт, революционизира живота на много хора с диабет.

В цялата история на медицината и фармацията на 20-и век, може би само една група лекарства със същото значение е възможно: антибиотици. Те, както и инсулинът, много бързо влязоха в лекарството и помогнаха за спасяването на много човешки животи.

Ден срещу диабет е белязана от по инициатива на Световната здравна организация, всяка година от 1991 г. насам на рождения ден на канадския физиолог F.Bantinga който открива хормонът инсулин, заедно с Dzh.Dzh.Makleodom. Нека да разгледаме как се прави този хормон.

Каква е разликата между инсулиновите препарати един от друг?

  1. Степен на почистване.
  2. Източникът на получаване е прасен, бичи, човешки инсулин.
  3. Допълнителни компоненти, включени в разтвора на лекарството, са консерванти, агенти, удължаващи действието и други.
  4. Концентрация.
  5. рН на разтвора.
  6. Възможността за смесване на лекарства с кратко и продължително действие.

Инсулинът е хормон, който се произвежда от специални клетки на панкреаса. Това е двойно-верижен протеин, който включва 51 аминокиселини.

В света около 6 милиарда инсулинови единици се използват всяка година (1 единица е 42 μg вещество). Производството на инсулин е високотехнологично и се извършва само по индустриални методи.

Източници на производство на инсулин

Понастоящем в зависимост от източника на производство са изолирани свински инсулин и човешки инсулинови препарати.

Свинския инсулин сега има много висока степен на пречистване, има добър хипогликемичен ефект, почти няма алергични реакции към него.

Препаратите на човешкия инсулин напълно съответстват на химическата структура на човешкия хормон. Те обикновено се произвеждат чрез биосинтеза, като се използват генетично конструирани технологии.

Производителите на големи фирми използват такива производствени методи, които гарантират съответствието на техните продукти с всички стандарти за качество. Не са разкрити големи разлики в ефектите на човешки и свински монокомпонентен инсулин (т.е., високо пречистен) по отношение на имунната система, според много изследвания, разликата е минимална.

Спомагателни компоненти, използвани при производството на инсулин

Във флакона с лекарството съдържа разтвор, съдържащ не само самия хормон инсулин, но и други съединения. Всеки от тях играе своята специфична роля:

  • удължаване на лекарството;
  • дезинфекция на разтвора;
  • наличието на буферни свойства на разтвора и поддържане на неутрално рН (киселинно-базов баланс).

Подновяване на инсулиновото действие

За да се създаде инсулин с удължено действие, едно от двете съединения, цинк или протамин, се добавя към разтвора на конвенционалния инсулин. В зависимост от това, всички инсулини могат да бъдат разделени на две групи:

  • протамин-инсулин - протопан, инсуман базал, NPH, хумулин N;
  • цинк-инсулин - инсулин-цинк-суспензия моно-тард, лента, хумулин-цинк.

Протаминът е протеин, но нежеланите реакции под формата на алергии към него са много редки.

За да се създаде среда на неутрален разтвор, към него се прибавя фосфатен буфер. Трябва да се помни, че инсулин съдържащи фосфати, строго забранено да се свърже с инсулинова цинкова суспензия (DSV) като цинков фосфат с утайката и ефекта на цинк-инсулин съкратен в непредсказуеми начини.

Дезинфекциращи компоненти

Някои от съединенията, които имат дезинфекционен ефект, са тези, които съгласно фармако-технологичните критерии трябва да бъдат въведени в препарата по този начин. Те включват крезол и фенол (и двата имат специфична миризма) и метилпарабензоат (метилпарабен), който няма мирис.

Въвеждането на някой от тези консерванти и предизвиква специфична миризма на някои инсулинови препарати. Всички консерванти в количеството, в което се намират в инсулинови препарати, нямат отрицателен ефект.

Протаминовите инсулини обикновено включват крезол или фенол. При фенолните разтвори фенолът не може да се добави, защото променя физическите свойства на хормоналните частици. Тези лекарства включват метилпарабен. Също така, антимикробното действие се притежава от цинкови йони, които са в разтвор.

Благодарение на тази многоетапна антибактериална защита с помощта на консерванти се предотвратява развитието на възможни усложнения, което може да бъде причинено от бактериално замърсяване с повторно въвеждане на иглата във флакона с разтвор.

Поради наличието на такъв защитен механизъм, пациентът може да използва същата спринцовка за хиподермични инжекции на лекарството в продължение на 5 до 7 дни (при условие, че се използва само една спринцовка). Освен това консервантите правят възможно да не се използва алкохол за лечение на кожата преди инжектирането, но отново само ако пациентът се инжектира със спринцовка с тънка игла (инсулин).

Калибриране на инсулинови спринцовки

При първите инсулинови препарати само една единица от хормона се съдържа в един ml от разтвора. По-късно концентрацията се увеличава. Повечето от инсулиновите препарати във флакони, използвани в Русия, съдържат 40 единици в 1 ml от разтвора. Флаконите обикновено се маркират със символа U-40 или 40 единици / ml.

Инсулинови спринцовки, предназначени за широка употреба, само за този инсулин и калибрирането на следния принцип: в комплект спринцовка 0.5 мл лица да получат 20 единици, 0.35 мл, съответстващи на 10 единици и така нататък.

Всеки знак върху спринцовката е равен на определен обем и пациентът вече знае колко единици в този обем се съдържат. По този начин калибрирането на спринцовките е калибриране по обем на лекарството, предназначено да използва инсулин U-40. 4 единици инсулин се съдържат в 0,1 ml, 6 единици в 0,15 ml от препарата и така нататък до 40 единици, които съответстват на 1 ml от разтвора.

В някои страни се използва инсулин, от които 1 ml съдържа 100 единици (U-100). За такива лекарства се произвеждат специални инсулинови спринцовки, които са подобни на тези, които бяха обсъдени по-горе, но са калибрирани по различен начин.

Тя отчита точно тази концентрация (тя е 2,5 пъти по-висока от стандартната концентрация). В този случай дозата инсулин за пациента, разбира се, остава същата, тъй като удовлетворява нуждата на тялото от специфично количество инсулин.

Това е, ако преди пациентът използва лекарството U-40 и се инжектират дневно хормон звена 40, а след това тези блокове 40 той трябва да получат инсулинови инжекции и U-100, но да го въведе в количество от 2.5 пъти по-малко. Тоест същите 40 единици ще се съдържат в 0,4 ml от разтвора.

За съжаление, не всички лекари и по-болните от диабет знаят за това. Първите трудности започнаха, когато някои от пациентите преминаха към употребата на инсулинови инжектори (спринцовки), в които се използват писалки (специални патрони), съдържащи инсулин U-40.

Ако въведете разтвор с означение U-100 в такава спринцовка, например до 20 единици (т.е. 0,5 ml), тогава този обем ще съдържа до 50 единици от лекарството.

Всеки път, когато се пълни инсулин с U-100 редовни спринцовки и се гледа на границата на единиците, човек ще получи доза 2,5 пъти по-голяма от тази, показана на нивото на този знак. Ако нито лекарят, нито пациентът своевременно забелязват тази грешка, тогава има голяма вероятност да се развие тежка хипогликемия, дължаща се на постоянно предозиране на лекарството, което на практика често се случва.

От друга страна понякога има инсулинови спринцовки, калибрирани точно за лекарството U-100. Ако такава спринцовка е погрешно напълнена с обичайния разтвор на U-40, дозата инсулин в спринцовката ще бъде 2,5 пъти по-ниска от тази, записана близо до съответния знак на спринцовката.

В резултат на това на пръв поглед е възможно необяснимо повишаване на глюкозата в кръвта. В действителност, разбира се, всичко е съвсем логично - за всяка концентрация на лекарството е необходимо да се използва подходяща спринцовка.

В някои страни, например в Швейцария, планът е внимателно обмислен, според който е извършен компетентен преход към инсулинови препарати, обозначени като U-100. Но това изисква тесен контакт с всички заинтересовани страни: лекари от много специалности, пациенти, медицински сестри от отдели, фармацевти, производители, власти.

В нашата страна е много трудно да се прехвърлят всички пациенти само върху употребата на U-100 инсулин, защото най-вероятно това ще доведе до увеличаване на броя на грешките при определяне на дозата.

Съвместно използване на краткотрайни и дългодействащи инсулини

В съвременната медицина лечението на диабета, особено на първия тип, обикновено се случва, като се използва комбинация от два вида инсулин - кратко и продължително действие.

За пациентите би било много по-удобно, ако лекарства с различна продължителност на действие могат да се комбинират в една спринцовка и да се инжектират едновременно, за да се избегне пробиването на двойната кожа.

Много лекари не знаят какво определя възможността за смесване на различни инсулини. Това се основава на химичната и галеновата (определена от състава) съвместимост на инсулина с продължително и кратко действие.

Много е важно, когато смесвате два типа лекарства, бързото начало на действие на къс инсулин не се разширява или изчезва.

Доказано е, че за кратко действащ лекарството може да се комбинира в единична инжекция с протамин инсулин, стартирането на кратко инсулин не се забавя, тъй като няма свързване на разтворим инсулин с протамин.

В същото време производителят на лекарството няма значение. Например, инсулинът actrapid може да се комбинира с хумулин Н или протафан. Освен това смеси от тези препарати могат да бъдат съхранявани.

Що се отнася до препарати на цинк-инсулин Отдавна е установено, че цинк инсулинова суспензия (кристал) не може да бъде свързан с кратко инсулин, защото той се свързва с излишък на цинкови йони и се трансформира в продължителен инсулин, понякога частично.

Някои пациенти първо инжектират кратко действащо лекарство, след което, без да отстраняват иглите от кожата, леко променят посоката си и инжектират цинк-инсулин през него.

В такъв начин на приложение харчи доста малко на научните изследвания, така че ние не можем да изключим факта, че в някои случаи този метод за инжектиране под кожата може да образува комплекс цинк инсулин и кратко действащ наркотик, което води до малабсорбция на последните.

Затова е по-добре да въведете кратко инсулин е напълно отделна от цинк инсулин, за да се направи две отделни инжекции в кожата намира на разстояние, най-малко от 1 см. Това не е удобно, какво не трябва да се каже за стандартната рецепцията.

Комбиниран инсулин

Сега фармацевтичната индустрия произвежда комбинирани препарати, съдържащи инсулин с кратко действие, заедно с протамин инсулин, в строго определен процент. Тези лекарства включват:

Най-ефективните комбинации са тези, при които съотношението на краткия и удължения инсулин е 30:70 или 25:75. Това съотношение винаги е посочено в инструкциите за употреба на всеки отделен препарат.

Такива лекарства са най-подходящи за хора, които наблюдават постоянна диета, с редовна двигателна активност. Например, те често се използват от възрастни пациенти с диабет тип 2.

Комбинираният инсулин не е подходящ за прилагане на т.нар. "Гъвкава" инсулинова терапия, когато е необходимо непрекъснато да се променя дозата на краткодействащия инсулин.

Например, това трябва да се направи чрез промяна на количеството въглехидрати в храната, намаляване или увеличаване на физическата активност и т.н. В този случай дозата на основния инсулин (продължителен) практически не се променя.

Захарният диабет заема третото място на планетата в разпространението. Той изостава само от сърдечно-съдови заболявания и онкология. Според различни данни броят на хората с диабет в света варира от 120 до 180 милиона души (около 3% от всички жители на Земята). Според някои прогнози, на всеки 15 години броят на пациентите ще се удвои.

За да се проведе ефективна инсулинова терапия, е достатъчно да има само едно лекарство, кратко действащ инсулин и един продължителен инсулин, те могат да се комбинират един с друг. Също така в някои случаи (главно за възрастни пациенти) съществува необходимост от комбинирано лекарство.

Съвременните препоръки определят следните критерии за избор на инсулинови препарати:

  1. Висока степен на пречистване.
  2. Възможност за смесване с други видове инсулин.
  3. Ниво на неутрално рН.
  4. Препаратите от категорията на продължителния инсулин трябва да имат продължителност на действие от 12 до 18 часа, така че да е достатъчно да се инжектират два пъти дневно.

Технология на производството на човешки инсулини в Русия

Съвременното биотехнологично производство на инсулин е сложен процес, базиран на генетичната модификация на микроорганизмите. Този метод е сравнително нов и е въведен в производство през осемдесетте години на миналия век. С негова помощ се получава лекарство, което напълно съответства на това, което се произвежда в човешкото тяло. Оттук и името "човешки инсулин".

Трябва да се отбележи, че този термин "човешки инсулин" понякога причинява няколко неточни реакции и предположения, че лекарството се получава от човешкото тяло. Поради тази причина често се задава въпросът: "Как се произвежда инсулинът" - и откъде идва това определение.

Наистина, доскоро технологията на производството на инсулин беше съвсем различна. Тя е извлечена от тялото на свине или говеда и е наречена съответно, например, прасе или говеда. Въпреки това, тази технология за производство е стара и има редица сериозни недостатъци, сред които на първо място е невъзможността да се получи чистото вещество примеси проинсулин, без да причиняват човек различни алергични реакции и продукция на антитела.

Аптеките отново искат да спечелят от диабетици. Има разумен съвременен европейски наркотик, но той е спокоен. Това.

В допълнение, поради постоянното нарастване на броя на случаите на диабет, животински суровини за производство на инсулин не е достатъчно, и това беше още един стимул за търсене на нови съвременни методи на получаването му по изкуствен път.

Към днешна дата човешки или рекомбинантен препарат се получава от щамове на дрожди или Escherichia coli. Тези вещества не са избрани случайно: по време на растежа им в хранителната среда те произвеждат огромно количество от необходимия хормон. Това означава, че този процес е не само технологично в природата, но също така биологични, защото желаното вещество, произведено от живи организми, и след това се превръща, не химически синтезирани.

Трябва да се отбележи, че науката е преминала през труден и труден път, преди да бъде намерен и въведен в производство биотехнологичен метод за получаване на лекарство за диабетици. За първи път точното съставяне на човешки инсулин е създадено през 60-те години на миналия век. Оказа се, че неговите молекули имат различен аминокиселинен състав, различен от аминокиселината от животински произход. По-късно бяха направени опити да се замени една аминокиселина с друга, между другото, доста успешна, но много скъпа. Този метод се считаше за нерентабилен и непромокаем не само в нашата страна, но и в чужбина.

И само след две десетилетия упорита работа беше възможно да се получи абсолютно чист препарат, напълно съответстващ на това, което се получава в тялото на здрав човек, което не предизвиква отхвърляне и алергични реакции.

Производство на човешки инсулин се основава на метод на генното инженерство, при който молекулата на ДНК в гена на дрождите е включен, за определяне на хормон, напълно подобен на този, произведен от човек. Този метод се използва широко във всички развити страни по света и ви позволява да получавате лекарства за лечение на диабет с най-високо качество и в точното количество.

В близко бъдеще е планирано производство на инсулин в Русия. Изграждането на работилницата в град Урал вече е в ход. Понастоящем обаче наркотиците за лечение на пациенти със захарен диабет се закупуват в чужбина, от които се отделят огромни суми от бюджета на страната.

Трябва да се отбележи, че технологията на нейното производство вече е била тествана в Русия от опит и са получени отлични резултати. Нашите домашни лекарства бяха по-ефективни и по-чисти. Остава само да се установи производственият процес.

Аз страдах от диабет в продължение на 31 години. Сега е добре. Но тези капсули са недостъпни за обикновените хора, те не искат да продават аптеки, не е изгодно за тях.

Технология на производството на инсулин

Нарушаване на секрецията на инсулин. Използване на афинитетна хроматография. Схемата за получаване на инсулин. Експресия на проинсулин в Е. coli клетки. Подходи за решаване на проблема със захарния диабет. Принос на биотехнологията за индустриалното производство на непептидни хормони.

Изпращането на добрата ви работа до базата знания е лесно. Използвайте формата по-долу

Студенти, завършили студенти, млади учени, които използват базата от знания в своето обучение и работа, ще ви бъдат много благодарни.

Хоствано на http://www.allbest.ru/

Хоствано на http://www.allbest.ru/

Хоствано на http://www.allbest.ru/

Министерство на образованието и науката на Република Казахстан

КАЗАХ АГРОТЕХНИЧЕСКИ УНИВЕРСИТЕТ СЛЕД S. S. SEYFULLIN

Министерство на микробиологията и биотехнологиите

Съгласно дисциплината "Биотехнология на влажните организми"

На темата: Технология на получаване на инсулин

Завършен: Мирзабек М? Ддър Курбанбек?

Проверен: AK Akimbaev (кандидат по биология)

СЪКРАЩЕНИЯ И СИМВОЛИ

1. История на откритието

2. Получаване на инсулин в биотехнологията

3. Методи за получаване на човешки инсулин

4. Експресия на проинсулин в клетките Е. coli

5. Почистване на инсулина

6. Метод на приложение и доза

В този курс се използват следните определения:

Протеинов носител - осигуряване на транспортиране на слетия протеин до периплазменото пространство на клетката или културната среда;

Афинитетният компонент е основен фактор за изолиране на слетия протеин.

инсулин (от латински. инсула - остров) - хормон с пептидна природа, се образува в бета клетки на островите на Лангерханс панкреас.

интерлевкини - група цитокини, синтезирани основно от левкоцити (поради тази причина беше избран крайът "-леукин").

проинсулин - това е предшественик на инсулин, синтезиран от В клетки от островния апарат на панкреаса.

хроматограмиибиография (от гръцка хрома, хроматография - цвят, боя), физикохимичен метод за разделяне и анализ на смеси въз основа на разпределението на техните компоненти между две фази - стационарен и подвижен (елуент), преминаващ през стационарен.

капсулиране - механизъм за програмиране, който ограничава достъпа до компонентни компоненти (методи и свойства), ги прави частни, т.е. достъпни само в рамките на обекта.

Хибриден протеин (Eng. fusionprotein, също химерен, композитен протеин) е протеин, получен чрез комбиниране на два или повече гена, които първоначално кодират отделни протеини.

Gormзанас (От гръцката hormao -. Цитиране желание за движение), хормони, биологично активни вещества, произвеждани от жлезите с вътрешна секреция или жлезите с вътрешна секреция, и те директно се секретира в кръвта.

захар диабет-група ендокринни заболявания, които се развиват в резултат на абсолютен или относителен дефицит на инсулиновия хормон.

капсулиране - механизъм за програмиране, който ограничава достъпа до компонентни компоненти (методи и свойства), ги прави частни, т.е. достъпни само в рамките на обекта.

соматостатин - хормон на делта-клетките на островчетата на Лангерханския панкреас, както и един от хормоните на хипоталамуса.

Радиоимунен анализ - Метод за количествено определяне на биологично активни вещества (хормони, ензими, лекарства и др.) в биологични течности, въз основа на конкурентното свързване на желаната стабилна и подобни радионуклид белязано вещество свързване към специфични системи.

СЪКРАЩЕНИЯ И СИМВОЛИ

HPLC - високоефективна течна хроматография

сДНК - комплементарна дезоксирибонуклеинова киселина

Основната функция на инсулина е да осигури пропускливостта на клетъчните мембрани към глюкозните молекули. В опростена форма, може да се каже, че не само въглехидрати, но също така и всички хранителни вещества, в крайна сметка разцепват до глюкоза, която се използва за синтез на други съдържащи въглерод молекули и е единственият вид на електроцентрали горивни клетки - митохондриите. Без инсулин, пропускливостта на клетъчните мембрани на глюкозата падне до 20 пъти, и клетките умират от глад, и се разтваря в излишък отрови на кръвната захар на тялото.

Нарушаването на секрецията на инсулин поради унищожаването на бета клетки - абсолютен инсулинов дефицит - е ключово звено в патогенезата на захарен диабет тип 1. Нарушаването на действието на инсулин върху тъканите - относителна инсулинова недостатъчност - има важно място в развитието на диабет от 2-ри вид.

Използването на афинитетна хроматография значително намалява съдържанието на замърсяващи протеини в препарата с по-висок lm от инсулина. Такива протеини включват проинсулин и частично разцепен проинсулин, които са способни да индуцират производството на анти-инсулинови антитела.

Използването на човешки инсулин от самото начало на лечението намалява до минимум появата на алергични реакции. Човешкият инсулин се абсорбира по-бързо и независимо от формата на лекарството има по-кратка продължителност на действие от животинския инсулин. Човешкият инсулин е по-малко имуногенен от свинското, особено смесения говежди и свински инсулин.

Целта на тази работа е да се проучи технологията за получаване на инсулин. За постигане на следните задачи бяха определени:

1.Предготвяне на инсулин в биотехнологиите

2. Методи за получаване на инсулин

Н. пречистване на инсулин

Историята на откриването на инсулин е свързана с името на руския лекар IM. Соболев (втората половина на XIX век), който доказва, че нивото на захар в кръвта на човек се регулира от специален хормон на панкреаса.

През 1922 г., на инсулин, извлечени от панкреаса на животно, за първи път е въведена десетгодишното момче с диабет към резултатите надмина всички очаквания, а година по-късно фирмата САЩ «Ели Лили» освобождава първия препарат от животински инсулин.

След получаването на първата индустриална партида инсулин през следващите няколко години, преминава дълъг път на изолация и пречистване. В резултат на това хормонът стана достъпен за пациенти с диабет тип 1.

През 1935 г. датският изследовател Hagedorn оптимизира действието на инсулина в организма, като предлага продължително лекарство.

Първите кристали на инсулина са получени през 1952 г., а през 1945 г. английският биохимик Г. Сангер дешифрира структурата на инсулина. Разработването на методи за пречистване на хормона от други хормонални вещества и продукти от разграждането на инсулин е направило възможно да се получи хомогенен инсулин, наречен еднокомпонентен инсулин.

В началото на 70-те. Съветските учени А. Юдаев и С. Швачкин предложиха химичен синтез на инсулин, но прилагането на този синтез в промишлен мащаб беше скъпо и нерентабилно.

След това преминава прогресивно подобряване на пречистването на инсулин, което намалява проблемите, причинени от инсулинова алергия, бъбречни заболявания и имунни разстройства на инсулинова резистентност. Беше необходим най-ефективният хормон за заместителна терапия при захарен диабет - хомоложен инсулин, т.е. човешки инсулин.

През 80 - те години, постиженията в молекулярната биология бяха синтезирани с помощта на Е. coli И двете вериги на човешки инсулин, които след това са свързани към биологично активна молекула, хормон и Института за Bioorganic Chemistry рекомбинантен инсулин получен с помощта на генетично конструирани щамове Е. coli.

2. Получаване на инсулин в биотехнологията

Инсулинът, пептиден хормон на островите на Лангерхан на панкреаса, е основното лечение на захарен диабет. Това заболяване се причинява от недостиг на инсулин и се проявява с повишени нива на кръвната глюкоза. До неотдавна инсулин беше получен от панкреаса на бик и прасе. Лекарството се различава от човешкия инсулин с 1-3 аминокиселинни замествания, така че възниква опасност от алергични реакции, особено при деца. Големият терапевтичен прием на инсулин е ограничен от високите разходи и ограничените ресурси. Чрез химическа модификация, инсулинът от животните се прави неразличимо от човешкото, но това означава допълнително увеличение на цената на продукта. [1]

Фирмата Ели Lilly от 1982 г. произвежда генетично модифициран инсулин въз основа на отделен синтез E. colieА- и В-вериги. Цената на продукта е намаляла значително, полученият инсулин е идентичен с този на човека. От 1980 г. в пресата има съобщения за клонирането на проинсулиновия ген, предшественик на хормона, който се превръща в зряла форма с ограничена протеолиза.

За да са свързани с лечението на диабет капсулиране технология: панкреасни клетки в капсула, след въвежда в тялото произвежда инсулин на пациента в рамките на една година.

Фирмата Интегрирана генетика пуснаха освобождаването на фоликуло-клостимулиращи и лютенизиращи хормони. Тези пептиди се състоят от две подединици. На дневен ред въпроса за промишлен синтез на олигопептид хормон -enkefalinov нервна система, изградена от пет аминокиселинни остатъка и ендорфини, морфин аналози. С рационалното използване на тези пептиди облекчаване на болката, създаване на добро настроение, повишаване на ефективността, фокусиране на вниманието, подобряване на паметта, поставяне на съня и събуждането. Пример за успешното прилагане на методите на генното инженерство може да бъде р-ендорфин синтез на хибридни протеини на технологията, описани по-горе за други пептиден хормон, соматостатин [2].

3. Методи за получаване на човешки инсулин

Исторически, първият метод за получаване на инсулин за терапевтични цели е изолирането на хормонални аналози от природни източници (панкреатични островчета говеда и свине). През 20-те години на миналия век, беше установено, че говежди и свински инсулин (които са най-подобни на човешки инсулин в структура и аминокиселинната последователност) в проявяват активност на човешкото тяло сравнима с човешки инсулин. След това, за дълго време за лечението на пациенти с диабет тип I, се използва инсулинов бик или прасета. Обаче след известно време се доказва, че в някои случаи антителата срещу говежди и свински инсулин започват да се натрупват в човешкото тяло, като по този начин обезсилят ефекта им.

От друга страна, едно предимство на този метод е наличието на производство на инсулин суровина (говеждо и свинско инсулин може да се получи и в големи количества), който е играл важна роля в развитието на първия метод за производство на човешки инсулин. Този метод се нарича полусинтетично [3].

С този метод за получаване на човешки инсулин се използва свински инсулин като изходна суровина. От пречистения свински инсулин разцепва С-терминалния октапептид В-верига се синтезира и след това С-крайната октапептид човешки инсулин. След това се свързва химически, защитните групи се отстраняват и инсулинът се пречиства. При тестването на този метод за получаване на инсулин е показана пълната идентичност на получения хормон с човешкия инсулин. Основният недостатък на този метод е високата цена на получения инсулин (дори сега химическият синтез на октапептид е скъпо удоволствие, особено в промишлен мащаб).

Понастоящем човешкият инсулин се получава главно по два начина: чрез модифициране на свински инсулин чрез синтетичен ензимен метод и чрез генно инженерство.

В първия случай методът се основава на факта, че свинският инсулин се различава от човешкия инсулин чрез едно заместване в С-края на В-веригата Ala30Thr. Аланин за заместване треонин се извършва чрез ензимно-катализирано разцепване и свързваща аланин вместо защитена карбоксилна група треонинов остатък присъства в реакционната смес в голям излишък. След разцепване на защитната О-трет.-бутилова група се получава човешки инсулин. (Фигура 1)

Фигура 1 - Схема на методите за получаване на човешки инсулин

Инсулинът е първият протеин, получен за търговски цели, използвайки рекомбинантна ДНК технология. Съществуват два основни подхода за получаване на човешки инсулин, генетично модифициран. В първия случай, че разделянето се извършва (различни щам продуцент) Получаване на двете вериги, последвани от сгъването на молекулата (образуването на дисулфидни мостове) и разделяне mizoform. Във втори - получаване на прекурсор (проинсулин), последвано от ензимно разграждане с трипсин и карбоксипептидаза. В до активната форма на хормона. Най-предпочитани понастоящем е да се осигури инсулин като прекурсор осигуряване правилното приключването на дисулфидните мостове (в случай на отделни приемните вериги, извършена последователни цикли на денатурация, ренатурация и mizoform разделяне [3].

При двата подхода е възможно индивидуално да се получат началните компоненти (А- и В-вериги или проинсулин) и като част от слетите протеини. В допълнение към А- и В-веригите или проинсулина, слети протеини могат да включват:

1) протеинов носител - транспортиране на хибридния протеин до периплазменото пространство на клетката или културната среда;

2) афинитетен компонент - значително улесняващ изолирането на слетия протеин.

И двата компонента могат едновременно да присъстват в състава на слетия протеин. В допълнение, когато се създават хибридни протеини, може да се използва мултимерния принцип (т.е. няколко копия на целевия полипептид присъстват в хибридния протеин), което прави възможно значително да се увеличи добивът на целевия продукт [4].

Напрежение JM 109 N1864 с нуклеотидна последователност, вградена в плазмида, която експресира слят протеин, който се състои от линеен проинсулин и протеинов фрагмент, прикрепен към неговия N-край чрез метионинов остатък АСтафилококус ауреус. Култивирането на наситената биомаса на клетките от рекомбинантния щам осигурява началото на производството на хибриден протеин, изолирането и последователната трансформация на които intube води до инсулин. Друга група получава в бактериална експресионна система, рекомбинантен слят протеин, състоящ се от човешки проинсулин и свързан към него, по метионинов остатък полихистидин "опашка". Той се изолира чрез използване на хелатна хроматография върху Ni-агарозни колони от включените тела и се смила с бромоцианин. Авторите установяват, че изолираният протеин е S-сулфуризиран. Картиране и мас спектрометричен анализ на получения проинсулин пречиства чрез йонообменна хроматография върху анионния обменник и RP (обратна фаза) HPLC (високоефективна течна хроматография) показва наличие на дисулфидни мостове, съответстващ дисулфидни мостове на нативен човешки проинсулин. Също така се съобщава за разработването на нов подобрен метод за получаване на човешки инсулин чрез методи за генно инженерство в прокариотни клетки. Авторите са установили, че в резултат на инсулина по структура и биологична активност идентичен хормон изолирани от панкреаса [5].

Напоследък е отделено голямо внимание на опростяването на процедурата за получаване на рекомбинантен инсулин чрез методи за генно инженерство. По този начин, фузионен протеин, състоящ се от пептид на интерлевкин-водещ пептид, свързан към N-края на проинсулин, се получава чрез лизинов остатък. Протеинът е ефикасно експресиран и локализиран в включени тела. След изолирането протеинът се разцепва с трипсин, за да се произведе инсулин и С-пептид. Друга група изследователи са действали по подобен начин. Слепващ протеин, състоящ се от проинсулин и два синтетични домена на протеин А на стафилококи, свързващ IgG, локализирани в органите за включване, но притежават по-високо ниво на изразяване. Протеинът се изолира чрез афинитетна хроматография, като се използва IgG и се третират с трипсин и карбоксипептидаза В. Полученият инсулин и С-пептид се пречистват чрез RP HPLC. При създаването на слети структури съотношението на протеиновата маса на носителя и целевия полипептид е много важно. По този начин се описва конструкцията на слети структури, където протеин свързващ човешки серумен албумин се използва като носещ полипептид. Към него се добавят един, три и седем С-пептида. С-пептидите са свързани чрез принципа "главата-опашка" с помощта на аминокиселинни разделители, носещи ограничаващо място Сфи I и два остатъка от аргинин в началото и края на разделителя за последващо смилане на трипсиновия протеин. Продуктите с разграждане чрез HPLC показват, че разграждането на С-пептида се определя количествено и това позволява да се използва метод на мултимерни синтетични гени за получаване на целеви полипептиди в промишлен мащаб.

Произвеждане на мутантен проинсулин, който съдържа заместител Arg32Tyr. Когато белтъкът беше усвоен с трипсин и карбоксипептидаза В, се образува естествен инсулин и С-пептид, съдържащ тирозинов остатък. Последният, след маркиране с 125I, активно се използва в радиоимуноанализ [6].

Още Статии За Диабет

Как да вземем теста за инсулин?За анализа няма нужда от много подготовка. Достатъчно е да си лягате вечер, а сутрин, да се събуждате, не яжте и не пийте нищо.

Glucometer * "Сателит"

Усложнения

* Глюкомер "Сателит" (Експрес-метър за концентрация на кръвната захар, преносим PKG-02 "Сателит", комплектован с лента от електрохимични еднократна употреба PKGE-02 "Сателит") Глюкомер "Сателит" е предназначен да определи концентрацията на глюкоза в човешката капилярна кръв.

Нарушенията на въглехидратния метаболизъм в организма могат да бъдат изразени във външния вид на захарта в урината, неразумното наддаване на тегло, повишения натиск. Анализът за кривата на захарта показва дали пациентът има отклонение в асимилацията на глюкозата.

Видове Диабет

Популярни Категории

Кръвната Захар